实用专题：解冻过程中，发现细胞存活率低该如何解决？（11.12周四）

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精彩内容

在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题， 是什么原因导致，该怎么进行解决？现在我们大家一起往下看吧。或许能给您的实验问题的解决找到答案！

低存活率

出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：

1.解冻过程中细胞裂解

推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为106至107细胞/毫升。

2.解冻过程中的问题

推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的首选方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养。

3.对冷冻液过敏

推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。

B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的最佳条件在对数期。

4.被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄

推荐的解决方案：解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。

大量细胞碎片

出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下：

1.冷冻时细胞密度过低

推荐的解决方案：缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后，立即将冻存管浸入在37℃的水浴中，并震荡至全部融化，然后迅速地转移到预热的培养基中。

2.不适当的冷冻过程

推荐的解决方案：解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术，并确保使用了适量和适合的冷冻液。

生长缓慢

出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下：

1.培养瓶的大小

推荐的解决方案：一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中，使细胞密度上升；如，根据培养基的体积，从75cm2的烧瓶转移到2或3个25cm2的烧瓶中。

2.细胞密度过低

推荐的解决方案：提高未来冷冻物种细胞的冻存密度，或使用较小的培养容器，或解冻多个试管来进行培养。

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